علوم آزمایشگاهی | Lab sciences

در این پست در مورد اندازه گیری هموگلوبین به روش دستی سیانومتهموگلوبین (Hemiglobincyanide) صحبت خواهیم کرد . همان طور که می دانید امروزه از این روش هم به صورت دستی و هم به صورت دستگاهی زیاد استفاده می شود و اساس و روش آن هم در همه این شرایط یکی است . ابتدا آهن هموگلوبين توسط فري سيانيد پتاسيم اكسيده شده (همي گلوبين) سپس همي گلوبين توسط سيانيد پتاسيم تبديل به همي گلوبين سيانيد (متهموگلوبین سیانید) ميشود.این واکنش در دمای اتاق انجام می گیرد و مدت زمان لازم هم برای واکنش ۵ دقیقه می باشد .^{منبع : آزمایشگاه رفرانس ایران} 

نمونه | نمونه خون وریدی (Venipuncture) و تازه است که ضد انعقاد آن K2EDTA یا Na2EDTA به مقدار 1.5-2.2mg/ml می باشد .

مواد و وسائل مود نیاز

1. كليه وسايل شيشه اي مثل پي پتها و لوله ها استاندارد و كاليبره
2. از لحاظ شيميايي همه وسائل بالایی باد تميز باشند.
3. اسپكتروفتومتر كاليبره
4. استاندارد هموگلوبين

معرف مورد استفاده هم :

• KCN : 0.05g
• K3Fe(CN)6 : 0.02g
• KH2PO4(Anhydrous) : 0.140g
• Detergent : 0.51 ml
• Reagent water(Type 1) : 1000 ml                                 

مشخصات معرف | معرفی که حاوی فري سيانيد پتاسيم و سيانيد پتاسيم است باید ویژگی های زیر را داشته باشد :

1. شفاف و زرد رنگ
2. زمان لازم براي ايجاد واكنش 5 دقيقه يا كمتر
3. دترژانها ليز گلبول هاي قرمز و رسوب پروتئين ها را افزايش مي دهند.
4. در طول موج بيشتر از  480 نانومتر جذب نوری ندارد.
5. pH=7-7.4
6. در صورت كدورت دور ريخته شود.
7. هرماه  بصورت تازه تهيه شود.

روش رفرانس( Reference Method) | روش رفرانس در زیر معرفی شده است ولی در کارهای روتین ما معمولا 20 میکرولیتر خون را با 5 میلی لیتر معرف مخلوط می کنیم .

1. 100ميكروليتر خون با 25 ميلي ليتر معرف
2. 4/0 يا 5 /0 ميلي ليتر خون با 100 ميلي ليتر معرف
3. 04/0 ميلي ليتر خون با 10ميلي ليتر معرف

روش ازمایش | غلظت هموگلوبين نمونه  با استفاده از جذب نوري نمونه در طول موج 540 نانومتر در مقابل بلانك با كمك جذب نوري  و غلظت استاندارد و يا با كمك منحني استاندارد محاسبه ميشود. واحد اندازه گيري هم گرم در ليتر است . ممکن است در انجام تست هموگلوبین تداخلاتی رخ دهد . لیپوپروتئینمیا ، لیپمیا ، لکوسیتوز ، افزایش پلاکت و هموگلوبین S می تواند در تست تداخل ایجاد کند .