- روشهاي رايج و سريع ميكروب شناسي جهت شناسائي باكتريها و قارچها ۱۰( آزمايش هيدروليز هيپورات )
-
برای دیدن لیست کل تست ها بحث شده در وبلاگ به اینجا بروید.
در ده سری ، تست های مربوط به شناسایی باکتری ها و سایر میکروارگانیسم های را در وبلاگ قرار دادم که در این پست هم آخرین سری از این آزمایشات را قرار می دهم . امیدوارم که مفید واقع شده باشند .
چندين گونه باكتري شامل استرپتوكوكهاي بتاهموليتيك گروه B ، گاردنرلاواژيناليس گونههاي ليستريا و باكتريهاي ديگر ، قادر به هيدروليز هيپورات هستند. وجود آنزيم هيپوريكاز (hyppuricase) بوسيله ديدن رنگ محصول نهائي تشكيل شده وقتي كه نين هيدرين آمينواسيدهائي را كه در طي هيدروليز هيپورات توليد شدهاند را اكسيد ميكند، مشخص ميشود .
روش آزمایش
اصول: محصولات نهائي هيدروليز اسيد هيپوريك، گليسين و اسيد بنزوئيك ميباشد. گليسين با استفاده از معرف اكسيد كننده نين هيدرين د آمينه ميشود. محصول نهائي حاصل از اكسيداسيون نين هيدرين تشكيل يك رنگ ارغواني را ميدهد. محيط مورد استفاده بايد فقط حاوي هيپورات باشد، چون نين هيدرين ممكن است با هر اسيد آمينه موجود در محيط كشت يا ساير آبگوشتها واكنش نشان دهد.
روش انجام آزمايش
۱) سوبستراي هيپورات سديم 1% را به طريق زير آماده نمائيد :
-
هيپورات سديم (سیگما) 1 گرم
-
آب مقطر 100 ميلي ليتر
دو ماده فوق را مخلوط نموده و در لولههاي آزمايش كوچك پلاستيكي يكبار مصرف (75×12) با در پيچهاي فشاري به مقدار 4/0 ميلي ليتر در هر لوله تقسيم نمائيد. اين محلول به صورت يخ زده تا 6 ماه پايدار است.
۲) معرف نين هيدرين را به طريق زير آماده نمائيد :
-
نين هيدرين (سیگما) 5/3 گرم
-
استون 50 ميلي ليتر
-
بوتانول 50 ميلي ليتر
استون و بوتانول را با هم مخلوط نموده و سپس نين هيدرين را اضافه نمائيد. محلول در شيشه قهوه اي رنگ با يك درپوش محكم حداكثر به مدت 6 ماه در درجه حرارت اتاق پايدار است.
۳) اجازه دهيد سوبستراي يخ زده آب شده و يك لوله را با مقدار زيادي از كشت خالص ارگانيسم مورد آزمايش كشت دهيد. سوسپانسيون بايد شيري رنگ باشد.
۴) لولهها را به مدت 2 ساعت در حمام آب 35 درجه سانتيگراد انكوبه نمائيد.
۵) 2/0 ميلي ليتر از معرف نين هيدرين را به لوله اضافه نموده و به مدت 15 دقيقه ديگر لوله را انكوبه نمائيد. در اثر هيدروليز هيپورات رنگ قهوه اي تيره در لوله مشاهده ميشود. اين آزمايش را ميتوان جهت شناسائي ساير ارگانيسمها نيز به كار برد.
نتايج مورد انتظار
پس از اضافه نمودن معرف نين هيدرين لوله حاوي كشت استرپتوكوك آگالاكتيه به صورت ارغواني پر رنگ (مثبت) و لوله انتروكوك به صورت بي رنگ يا اندكي زرد مايل به صورتي (منفي) در ميآيد.
كنترل كيفي
آزمايش را با كنترل مثبت استرپتوكوك آگالاكتيه (ATCC 27956) و كنترل منفي انتروكوكوس فكاليس (ATCC 19433 )مورد بررسي قرار دهيد.
