-
روشهاي رايج و سريع ميكروب شناسي جهت شناسائي باكتريها و قارچها ۹( آزمايش ترمونوكلئاز سريع)
-
برای دیدن لیست کل تست ها بحث شده در وبلاگ به اینجا بروید.
راه ديگر جهت تمايز بين استافيلوكوك اورئوس و استافيلوكوكهاي كوآگولاز منفي نشان دادن توليد دزوكسي ريبونوكلئاز مقاوم به حرارت توسط استافيلوكوك اورئوس ميباشد. انجام اين آزمايش بر روي مايع فوقاني كشت خون كه كوكسيهاي گرم – مثبت خوشه اي در آن رشد نموده و تشخيص سريع آن ضروريست، مفيد است. فقط بايد از محيطهائي كه توسط كارخانجات تهيه ميگردند جهت انجام اين روش اختصاصي استفاده نمود.
روش آزمایش
اصول: استافيلوكوك اورئوس را ميتوان با اطمينان بوسيله آنزيم دزاكسي ريبونوكلئاز مقاوم به حرارت شناسائي نمود. اگر ارگانيسم حرارت داده شود بقيه نوكلئازهاي حساس به حرارت تخريب ميشوند. نوكلئازهاي مقاوم به حرارت با محيط حاوي DNA و معرف رنگي واكنش ميدهند. رنگ مورد نظر تولوئيدين بلو ميباشد كه در هنگام اتصال به DNA آبي رنگ بوده و وقتي كه تركيب ساختماني آن عوض ميشود، تغيير رنگ ميدهد. شكسته شدن DNA بوسيله نوكلئازهاي مقاوم به حرارت ساختمان رنگ را تغيير داده و موجب ميگردد كه طول موج ديگري از نور را منعكس كرده و به رنگ قرمز يا صورتي (به جاي آبي) مشاهده شود.
روش انجام آزمايش
-
از كلنيهاي مجزا، چندين كلني را به يك ميلي ليتر آبگوشت BHI تلقيح نموده و به مدت 2 ساعت در 35 درجه سانتيگراد انكوبه نموده سپس روش را به صورت زير ادامه دهيد:
-
حدود دو ميلي ليتر از سوسپانسيون ارگانيسم در كشت خون (مخلوط شده يا نشده) يا آبگوشت BHI را در حمام آب يا مايكروويو به مدت 15 دقيقه بجوشانيد، و گلبولهاي قرمز در ته لوله به صورت لخته در ميآيند، اجازه دهيد لوله در درجه حرارت اتاق خنك شود.
-
با استفاده از انتهاي گشاد پيپت پاستور حفرهاي را در آگار محيط DNAse ايجاد نموده و آگار را خارج نمائيد. اين حفره را با دو قطره از محلول روئي سوسپانسيون حرارت ديده پر كنيد.
-
پليت را در حالتي كه در آن رو به بالا قرار دارد در 37 درجه سانتيگراد انكوبه نموده و پس از يك و دو مورد بررسي قرار دهيد.
-
پليت را ميتوان در يخچال نگهداري نموده و مجدداً مورد استفاده قرار داد.
نتايج مورد انتظار
استافيلوكوك اورئوس با ايجاد يك هاله صورتي يا قرمز رنگ در اطراف حفره واكنش مثبت ايجاد ميكند. در صورتي كه هيچ تغييري در اطراف حفره پر شده بوسيله ارگانيسم هائي كه فاقد اين آنزيم هستند، مشاهده نميشود. يك هاله شفاف كوچك در اطراف حفره نشانگر واكنش مثبت نخواهد بود، چون برخي از استافيلوكوكهاي كوآگولاز منفي ميتوانند بدون تقليب DNA (denaturating) رنگ را تجزيه نمايند.
كنترل كيفي
هر يك از محيطهاي جديد بايد با استفاده از سوسپانسيون كشت استافيلوكوك اورئوس و سوسپانسيون فاقد كشت ميكروبي به طور هفتگي مورد آزمايش قرار گيرند.
