-
روشهاي رايج و سريع ميكروب شناسي جهت شناسائي باكتريها و قارچها ۸( آزمايش اورهآز سريع)
-
برای دیدن لیست کل تست ها بحث شده در وبلاگ به اینجا بروید.
گونههاي پروتئوس – كلبسيلا، برخي از گونههاي سيتروباكتر، برخي از گونههاي هموفيلوس، مخمر كريپتوكوكوس نئوفورمانس و چندين باكتري و قارچ ديگر آنزيم اورهآز را توليد مينمايند. اين آنزيم اوره را به آمونياك، آب و دي اكسيد كربن هيدروليز ميكند. محصول نهائي قليائي سبب تغيير رنگ معرف فنل رد (Phenol red) از زرد به صورتي يا قرمز ميشود. اين آزمايش را ميتوان جهت غربالگري كلنيهاي لاكتوز – منفي كه در نتيجه كشت مدفوع بر روي محيطهاي افتراقي رشد نمودهاند استفاده كرد. اين آزمايش جهت افتراق گونههاي سالمونلا و شيگلا كه اورهآز منفي هستند، مورد استفاده قرار ميگيرد. (بايد توجه نمود كه يرسينيا انتروكوليتيكا كه يك پاتوژن مدفوعي است اورهآز – مثبت ميباشد). معرفهاي تجاري جهت انجام آزمايش اورهآز سريع در دسترس بوده و به صورت ديسك يا سوابهاي آغشته به معرف ميباشند. سواب را به كلني آغشته نموده و تغيير رنگ آن نشانه واكنش مثبت ميباشد.
روش آزمایش
اصول: آنزيم اورهآز موجب هيدروليز اوره به آمونياك ميگردد. قليائي شدن محيط در اثر حضور آمونياك سبب تغيير رنگ معرف فنل رداز زرد به قرمز ميگردد. در روش براث با فرهائي به كار رفتهاند كه تغييرات pH را كنترل نموده و واكنش را سرعت ميبخشند.
روش انجام آزمايش
آبگوشت اوره را به ترتيب زير تهيه می نمائيد :
عصاره مخمر 1/0 گرم
مونوپتاسيم فسفات 091/0 گرم
دي سديم فسفات 095/0 گرم
اوره 20 گرم
فنل رد 01/0 گرم
آب مقطر 1000 ميلي ليتر
-
تركيبات فوق را با هم مخلوط نموده و در لولههاي در پيچدار كوچك يا لولههاي در پيچدار بوروسيليكات در مقادير 5/0 ميلي ليتر تقسيم نمائيد. اين معرف به مدت 6 ماه پايدار ميماند.
-
مقدار زيادي از ارگانيسم را به لوله حاوي آبگوشت اوره تلقيح نمائيد.
-
لوله را در 35 درجه سانتيگراد انكوبه نموده و به مدت 15، 30، 60 دقيقه تا چهار ساعت از نظر تغيير رنگ به صورتي يا قرمز مشاهده نمائيد.
نتايج مورد انتظار
ارگانيسمهاي اورهآز مثبت (گونههاي پروتئوس) موجب تغيير رنگ آبگوشت به رنگ صورتي روشن يا قرمز ميشوند. اما ارگانيسمهاي اورهآز منفي (اشريشيا كولي) تغيير رنگ را در آبگوشت ايجاد نمينمايند.
پیروز باشین 
