- روشهاي رايج و سريع ميكروب شناسي جهت شناسائي باكتريها و قارچها ۶(حلاليت در صفرا )
- برای دیدن لیست کل تست ها بحث شده در وبلاگ به اینجا بروید.
استرپتوكوك پنومونيه داراي يك آنزيم اتوليتيك فعال است كه ديوارة سلولي خود ارگانيسم را در طي تقسيم سلولي ليز ميكند. هنگاميكه ارگانيسم تحت تأثير يك نمك صفراوي قرار گيرد (دزوكسي كولات سديم) ارگانيسم سريعاً اتوليز ميگردد (روش 6-2). ساير استراپتوكوكهاي آلفا هموليتيك داراي اين آنزيم فعال نبوده و در صفرا حل نخواهد شد. آزمايش حلاليت در صفرا ممكن است هميشه كارگر نباشد، زيرا كلنيهاي كهنه ممكن است آنزيم فعالشان از بين برود. بنابراين استرپتوكوكهاي غيرقابل حل در صفرا كه شبيه پنوموكوك به نظر ميرسند بايد توسط ساير روشها، جهت شناسائي بيشتر مورد آزمايش قرار گيرند.
روش آزمايش
اصول: استرپتوكوك پنومونيه در حضور سورفاكتانت دزوكسي كولات سديم (يكي از مهمترين تركيبات صفراوي) سريعاً اتوكاتاليز (اتوليز) ميشود. اگر كلني كشت ميكروبي در مدت 30 دقيقه توسط سورفاكتانت يا دترجنت تخريب شده و از بين برود پنوموكوك بودن آن مشخص ميشود.
روش انجام ازمایش
-
محلول نمك صفراوي را به ترتيب زير تهيه نمائيد. محلول 10% دزوكسي كولات سديم را در آب مقطر تهيه نموده و در درجه حرارت اتاق نگهداري نمائيد. در صورتيكه معرف استريل باشد ميتوان به مدت 6 ماه آنرا نگهداري نمود.
-
يك كلني مجزا در پليت آگار خوندار يا آگار شكلاتي انتخاب كرده و يك قطره از محلول نمك صفراوي را مستقيماً بر روي آن ميريزيم.
-
پليت را در يك سطح بسيار مسطح قرار دهيد. اين كار از شسته شدن كلنيهاي غيرپنوموكوكي كه منجر به ايجاد واكنشهاي مثبت كاذب ميگردد جلوگيري ميكند. اجازه دهيد كه پليت خشك شود. قرار دادن پليت در انكوباتور سرعت واكنش را تسريع ميكند.
-
وقتي كه معرف خشك شد (تقريباً 15 دقيقه) آن ناحيه را از نظر ناپديد شدن يا پهن شدن كلني اوليه كه نشان دهنده حلاليت در صفرا است مورد بررسي قرار می دهیم .
برسی نتایج
در زير قطره محلول نمك صفراوي استرپتوكوك پنومونيه ناپديد ميشود اما بقيه استرپتوكوكها تحت تأثير اين محلول قرار نميگيرند و بعد از خشك شدن محلول كلنيها به صورت برجسته و آشكار باقي ميمانند.
